生物樣本庫（biobank）是一種集中保存各種人類生物材料，用于疾病的臨床治療和生命科學(xué)研究的生物應(yīng)用系統(tǒng)。

人類生物材料包括生物大分子（DNA、RNA、蛋白質(zhì)等）、細(xì)胞、組織和器官等樣本。

近年來，生物樣本庫發(fā)展迅速，保存的人體樣本多達幾十種，而各個樣本庫并沒有采用標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一的低溫保存技術(shù)和方法，在長期的儲存過程中，可能造成所需要的樣本信息發(fā)生變化。

所以，在探索低溫保存機制的基礎(chǔ)上，選擇合適的低溫保存劑、升降溫速率等方法處理樣本后，儲存在合理的溫度環(huán)境中，是保證生物樣本長期保存質(zhì)量的關(guān)鍵。

                                                                 驊川科技智慧型生物樣本庫

一、常規(guī)樣本的采集與保存有何訣竅？

一致：實驗組與對照組取樣一致性，如組織樣本組織塊的大小、取樣部位，血液樣本性別年齡的匹配，尿液樣本取樣時間等；

除雜：去除與實驗無關(guān)的雜質(zhì)，如動物組織去血、植物組織去除泥土等污染物、菌體及細(xì)胞去除培養(yǎng)基等，推薦使用PBS緩沖液或者生理鹽水，吸水紙吸干殘留液體；

低溫：樣本預(yù)處理盡量低溫，可以在冰上進行雜質(zhì)去除和分裝的操作，低溫保存，通常保存在-80℃冰箱；

分裝：根據(jù)實驗用量進行分裝，避免反復(fù)凍融；

迅速：樣本收集，制備，存儲和運輸應(yīng)盡可能的迅速，壓縮樣本采集到正式實驗的時間；

標(biāo)記：用優(yōu)質(zhì)的記號筆清晰的標(biāo)記好樣品名稱，以免混淆樣本；

包裝：建議使用優(yōu)質(zhì)的凍存管收集樣本，以防在運輸和操作過程中樣本管破裂并對樣本造成污染。妥帖包裝，以防運輸過程中樣本遺失。

1、分子實驗 / RNA/DNA
（一）RNA提?。╭PCR/測序等）
01.組織樣本
組織取材在組織離體 30min 內(nèi)完成，取樣的動作要盡量快速利索，將組織切成任一方向小于 0.5 cm 的薄片（盡可能剪碎），抽取 1ml TRIzol 溶液于 2ml凍存管內(nèi)，將樣本完全浸沒于TRIzol溶液(如0.4g樣本需要約2.0 mL TRIzol的溶液)。液氮速凍后，-80°C保存。注意：為完全有效的保護組織樣本，該組織樣本應(yīng)完全浸沒入 TRIzol 溶液中并且組織樣本的任何一邊的最大厚度不應(yīng)超過 0.5 cm。因為RNA容易降解如不能立即進行提取實驗操作可使用儲存在 RNAlocker中，細(xì)胞或組織可在室溫下穩(wěn)定保存長達1個星期，在4°C可穩(wěn)定保存長達1個月，或永久保存在-20°C。

02.細(xì)胞樣本細(xì)胞收集后用PBS緩沖液快速洗一次，每5×106個細(xì)胞加入1 ml TRIzol，用槍頭反復(fù)抽打，直至看不見成團的細(xì)胞塊，整個溶液呈清亮而不粘稠的狀態(tài)；液氮速凍，-80℃保存。
03.血液樣本

1) 加入1 ml TRIzol和200-300μL新鮮血液（TRIzol:血液 = 3:1~5:1），用移液器吹打幾次以幫助裂解樣品中的細(xì)胞；

2) 樣品劇烈震蕩混勻1~2 min，直到絮狀物全部溶解；

3) 室溫孵育5 min以使核蛋白體完全分解；

4) 寫好編號，封口膜封存，-80℃凍存。注意：冰凍血液溶解過程中會有破碎的細(xì)胞釋放RNA酶，因此建議在冰凍前加入TRIzol，切勿直接凍存新鮮血液，保存好的血液應(yīng)避免反復(fù)凍融。
04. 運輸條件：干冰運輸。

（二）、DNA提取
1.組織樣本
取材后，PBS清洗2-3次，液氮速凍，-80℃保存；
2.細(xì)胞樣本
細(xì)胞收集沉淀后，液氮速凍，-80℃保存；
3.運輸條件：冰袋運輸。

2、蛋白實驗 / WB/ELISA

01.組織樣本
取新鮮組織，用無塵紙快速吸去血液，將組織剪成小塊，放入裝有液氮的錫箔紙中速凍后，放入液氮預(yù)冷的離心管中，液氮速凍5min后，-80 ℃保存。
02.細(xì)胞樣本
收集細(xì)胞懸浮液于1.5ml的離心管中，離心去上清，PBS洗滌三次，液氮速凍5min后，-80 ℃保存。
03.血清樣本
收集全血，室溫放置2h，4℃ 3000rpm/min 離心10min，吸取上部的血清即可，-80 ℃保存。
04.運輸條件：干冰運輸
全血：新鮮抗凝血，避免劇烈震蕩，避免凝血；立即提取。

3、病理實驗 

（一）石蠟切片
1. 組織樣本
取材后，PBS清洗2-3次，使用4%多聚甲醛固定，組織樣本需完全浸泡在固定液中，固定液的容量應(yīng)足夠，一般固定液與組織塊的體積比率應(yīng)大于10:1。室溫保存。
注意：取材樣本要新鮮，否則細(xì)胞內(nèi)溶酶體會破裂，造成細(xì)胞自融。
2. 細(xì)胞樣本
細(xì)胞爬片后，4%多聚甲醛固定30min，換PBS浸沒4度保存。
3. 運輸條件：常溫運輸;
4. 其他組織保存、固定等。

（二）冷凍切片
1. 動物組織樣本
①1-3min內(nèi)取樣，取樣組織2mmX2mm大小，盡量薄。如來不及修整組織大小，可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右，待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定，后續(xù)實驗無法完成，務(wù)必請重視此過程。
② 取材時盡量精確到需要觀察的目的部位（如觀察腎小球取腎皮質(zhì)；觀察胰島取胰島豐富的胰尾；皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定）。
③ 取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。
④ 組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4℃時樣本可保存1個月左右。

2. 細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞：
實驗?zāi)康闹攸c觀察細(xì)胞連接，將培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，不經(jīng)漂洗迅速加電鏡固定液，用細(xì)胞刮沿一個方向輕輕刮下細(xì)胞收集到離心管內(nèi)（避免刮破細(xì)胞）。實驗?zāi)康闹攸c觀察細(xì)胞器，對細(xì)胞形態(tài)形狀無特殊要求，用胰酶消化，離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀芝麻至綠豆大小，棄固定液后加新的電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中，固定液切勿冷凍結(jié)冰。
懸浮細(xì)胞：
離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀芝麻至綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中，固定液切勿冷凍結(jié)冰。